DETECCIÓN GENÓMICA Y EXPRESIÓN DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIANOS (a- y B-DEFENSINAS) EN MUCOSA INTESTINAL DE CRÍAS DE ALPACA (Vicugna pacos) - More B., Juan (2011)
El objetivo del presente estudio fue determinar la presencia genómica de ? - y ?- defensinas (Defa 8 y??-def alp) y sus niveles de expresión como ARN mensajeros, en muestras de mucosa intestinal de crías alpaca. Se colectaron muestras de yeyuno y sangre de 30 animales de 0 a 45 días de edad. Se extrajo el ADN genómico y los ARN mensajeros para el análisis por PCR y RT-PCR tiempo real, respectivamente. La prueba de PCR convencional determinó que todas las muestras amplificaron un segmento genómico de entre 800 y 900 pb correspondiente a una Defa 8, y el 90% (27/30) de las muestras amplificó un segmento esperado de 300 a 350 pb para ?-def alp y dos bandas adicionales de 800 a 900 pb, evidenciados en la electroforesis en gel de agarosa. La detección de ARN mensajeros por RT-PCR tiempo real se realizó en base al análisis de las curvas de amplificación (Ct) y curvas de disociación (Tm) de los productos amplificados. Las Cts de los amplificados de Defa 8 estuvieron entre 25.1 y 39.5 ciclos, con un promedio de 36.4 ± 1.9, y las Tm entre 79.1 y 85.7 ºC. Las Cts de los amplificados de ?-def alp estuvieron entre 22.7 y 36.8 ciclos, con un promedio de 32.4 ± 3.3, y las Tm tuvieron un rango de 71 a 81.9 ºC. Los niveles de expresión se determinaron por cuantificación relativa en base al método de Ct comparativo. Los resultados mostraron niveles crecientes de Defa 8 y ?- def alp hasta la 3ª semana, disminuyendo entre la 4ª y 6ª semana. Los resultados demuestran la presencia genómica y expresión de ? - y ?-defensinas en el yeyuno de las crías de alpaca menores de 45 días de edad.