Caracterización bacteriana por secuenciación molecular de cepas de salmonella aisladas de cuyes (Cavia Porcellus) y uso del Ozono (O3) para la elaboración de una vacuna inactivada - Fernández Fernández, Fernando Alberto (2017)
El presente trabajo de investigación se realizó en cuyes para identificar en forma molecular el agente causal de las lesiones características de Salmonelosis en cuyes, realizado en dos etapas. La primera fue el aislamiento en medios de cultivo y la secuenciación molecular de las cepas bacterianas mediante la determinación del orden de los nucleótidos en un oligonucleótido de ADN bacteriano aisladas en el estudio; y la segunda etapa fue la elaboración y administración de una vacuna inactivada por medio de ozono, a partir de las cepas aisladas e identificadas. Se aislaron tres cepas bacterianas a partir de órganos de cuyes a la necropsia de los mismos, estos aislamiento se realizaron en Agar Sangre, Agar MacConkey y Agar XLD (Xylosa Lysine Deosxicholate), presentando características macroscópicas de colonias cremosas; no fermentadoras de lactosa; e incolora con centro negro en cada medio de cultivo respectivamente; además de otras características como cocobacilos Gram negativas, oxidasa negativo y catalasa positiva. Luego del aislamiento e identificación se procedió a realizar 10 pasajes de pureza en Agar Nutritivo para obtener colonias en pureza y ser enviadas al laboratorio de ADN Uchumayo para la extracción de ADN y envío para su secuenciación. Secuencia del Gen 16s ribosomal de las Bacterias aisladas: Resultados obtenidos del secuenciador automático ABI 3730XL, secuencias del gen 16s ribosomal de las 3 bacterias aisladas de diferentes tejidos de Cavia porcellus. Las secuencias de las 3 bacterias fueron identificadas como Salmonella entérica sin subespecie identificada. Se preparó una suspensión de bacterias con un recuento de cada una de las 3 cepas entre 109 a 1012 por ml de suspensión. Se administró ozono por 10 minutos con un equipo de OzonoVida® de 50 mg de producción de ozono por hora, y se comprobó su inocuidad bacteriana en Agar Nutritivo a 37º C. Se adicionó Formol al 5% e Hidróxido de aluminio a una proporción final de 0.1% del total de la bacterina. De esta bacterina se administró vía subcutánea a 10 cuyes hembras y 10 cuyes macho de 2 semanas de edad y luego una dosis adicional a los 7 días posteriores a la primera. Al cabo de 2 semanas pasada la segunda vacunación y antes de la primera vacunación se tomaron muestras de sangre de uno de los dedos de la pata posterior de cada uno de los cuyes en experimentación para determinar al inicio su negatividad y al final para demostrar su positividad a presentación de anticuerpos mediante la prueba de aglutinación en placa. El antígeno utilizado para la prueba de aglutinación se preparó con la dilución inicial de la vacuna (bacterias de 109 a 1012 por ml de cada cepa identificada), luego de exposición por 10 minutos a ozono, se agregó formol al 5% y azul de metileno al 1%, conservado en refrigeración. La prueba de aglutinación para los sueros sanguinosos de los 10 cuyes hembras y 10 cuyes machos al inicio de la vacunación fueron negativos y positivos al cabo de 2 semanas después de la segunda vacunación a la prueba de aglutinación para los sueros sanguinosos de los 10 cuyes hembras y 10 cuyes machos.