Construcción de dos vectores conteniendo un gen inhibidor de tripsina unido al promotor de la β-amilasa y agro-transformación de camote (Ipomoea batatas Lam.) - Gutarra Castillo, Boris Augusto (2004)
El gorgojo del camote del genero Cylas spp es la mayor plaga del camote (Ipomoea batatas). Su rendimiento puede verse afectado hasta en un 80%. Un rango de estrategias de control esta disponible, entre ellas, la tecnología de los cultivos transgénicos. La transformación del camote con inhibidores de serino proteinasas ofrece una nueva estrategia para desarrollar resistencia contra esta plaga. Estas proteinas se unen a las proteinasas en el intestino medio del insecto interfiriendo con su metabolismo. El espectro de inhibición del inhibidor de tripsina de soja (Glicine max) gen SKTI contra las proteasas del intestino medio del insecto es mayor que los inhibidores endogenos del camote. El uso del promotor del gen de la β-amilasa, del camote (Ipomoea batatas), podría optimizar la expresión del gen inhibidor de tripsina de soja del tipo Kunitz (SKTI) en la raíz reservante del camote, para controlar al gorgojo Cylas spp. Bajo este criterio, en la presente tesis, se describe el diseño dos vectores binarios, designados como pCIP36 y pCIP37, ambos, conteniendo el gen skti-4 (un miembro de la familia de los genes SKTI) controlado por el promotor de la β-amilasa, y también, el empleo de uno de ellos para realizar un ensayo de agro-transformaciónPara construir el vector pCIP36, se procedió a realizar un clonamiento del promotor del gen de la β-amilasa del camote, en un plásmido pequeño, el pPCR-Script, para luego salir de éste, con sitios de restricción convenientes, que nos permitieron ligar el promotor al gen skti-4, el cual fue previamente clonado, en el plásmido binario pMOG800. Para construir el pCIP37, se utilizo el promotor de la β-amilasa obtenido mediante PCR, con iniciadores que nos permitieron incorporar sitios de restricción convenientes, a los extremos del promotor, para luego ligar simultáneamente, este, con el gen skti-4 en el plásmido binario pCAMBIA 1304.Los plásmidos así obtenidos, fueron verificados mediante análisis de restricción. Posteriormente, estos plásmidos, fueron utilizados para transformar cepas de Agrobacterium tumefaciens LBA4404 y enseguida cepas conteniendo el plásmido pCIP37 fueron utilizadas para agrotransformar camote, para ello, se utilizo como explantes hojas completas, incluyendo el peciolo (de 0.5 a 1 cm de longitud) de plantas in vitro, de 4 semanas, del cultivar Tanzania, obteniéndose posteriormente, callos potencialmente transgénicos, los que fueron evaluados mediante la expresión de los genes reporteros mGFP5 y GUSAsta.