Identificación de los Polimorfismos de Nucleótido Único (SNP’S), del Citocromo P450, CYP2C9*2 Y CYP2C19*2 Y *3, en Pacientes Epilépticos - Valdivia Candia, Carla Fanny (2018)
Los polimorfismos de nucleótido único (SNPs) constituyen una herramienta importante en la biotecnología y en especial en la biotecnología médica, particularmente en el estudio de la medicina personalizada. La variabilidad entre individuos en la respuesta a fármacos, es un grave problema en la práctica clínica y su desarrollo, pudiendo conducir a un fracaso terapéutico o efectos adversos. El citocromo P450 con su subfamilia CYP2C, relacionada al metabolismo de fármacos, se ha vinculado a la resistencia frente al tratamiento de la epilepsia, por lo que el objetivo del presente trabajo fue identificar y reportar polimorfismos de nucleótido único (SNPs), así como la frecuencia alélica en una población representativa de personas tanto con padecimiento de la enfermedad; como sanas, permitiendo conocer el estado polimórfico para poder así contribuir con el éxito del tratamiento; para esto, 80 pacientes epilépticos, entre los 15 y 80 años de edad, atendidos por consulta externa en el servicio de Neurología del Hospital Regional Honorio Delgado Espinoza de Arequipa fueron reclutados, además se incluyó un grupo control con 80 voluntarios no relacionados a la enfermedad, las muestras fueron procesadas en el Laboratorio de Biología Molecular y Farmacología Experimental de la Universidad Católica de Santa María, donde se analizó la genotipificación de CYP2C9 y CYP2C19, para lo cual se realizó la extracción de ADN genómico de células sanguíneas empleando el método de columnas de silica, la evaluación del producto de extracción comprendió de su cuantificación por fluorometría, donde se obtuvo en promedio 37.86 ng/μL de ADN genómico, para las muestras de pacientes epilépticos, y un promedio de 45.03 ng/μL para las muestras de voluntarios control, la calidad del ADN genómico se evaluó por espectrofotometría con la relación A260:A280 nm, donde se obtuvo para los pacientes epilépticos una relación promedio de 1.85, y para voluntarios control el promedio de esta misma relación fue de 1.86, finalmente la integridad del ADN genómico extraído se evidenció a través de la evaluación electroforética, cumpliendo de manera óptima con las condiciones para el análisis molecular; a su vez la identificación de polimorfismos se analizó mediante la amplificación de la secuencia de interés y su posterior digestión con las enzimas de restricción Sau96I (CYP2C9*2), SmaI (CYP2C19*2), y BamHI CYP2C19*3), este procedimiento en dos pasos comprende la técnica de PCR-RFLP que tras el análisis de todas las muestras se pudo concluir que la presencia de las variantes polimórficas en los genotipos y alelos pertenecientes a CYP2C9*2, CYP2C19*2 y CYP2C19*3, de pacientes epilépticos frente a los voluntarios control no presentan diferencia significativa, como tampoco la manifiesta una comparación intergrupal en cuanto a pacientes epilépticos farmacorresistentes y farmacorrespondedores, sin embargo se observó un efecto protector ante la presencia polimórfica de CYP2C9 y CYP2C19, que a pesar de no ser significativo en el presente estudio, también fue reportado por otros, sugiriendo favorecer a no desarrollar resistencia al tratamiento, por su parte el análisis poblacional de distribución genotípica evaluado mediante el equilibrio de Hardy-Weinberg señaló encontrarse en equilibrio para el grupo de voluntarios control, pero fuera de este, para el grupo de pacientes epilépticos lo que se podría interpretar como un cambio evolutivo en la población estudiada. Finalmente en cuanto a la relación del estado polimórfico de los genes CYP2C9*2, CYP2C19*2 y CYP2C19*3, se identificó que sus frecuencias alélicas se encuentran dentro del rango reportado en poblaciones Chinas, Japonesas, y Mexicanas. Palabras clave: CYP2C9, CYP2C19, Polimorfismo de nucleótido único (SNPs), PCR-RFLP