Expresión, purificación y actividad enzimática de la proteína recombinante Catepsina L5 de Fasciola hepatica (rCatL5Fh) obtenida en un sistema de expresión procariota (E. coli BL21) - Buiza Urdanivia, Yerson Jahel (2021)
Fasciola hepatica produce, durante la infección, una serie de cisteínas tipo catepsina L la cual permiten al parásito la invasión, alimentación y evasión del sistema inmune. El tremátodo expresa 7 isoformas de Catepsina tipo L, siendo catepsina L5 (CatL5Fh) secretada en mayor proporción en el estadio adulto; por lo que se considera que esta proteinasa está involucrada en la supervivencia y alimentación ya que puede degradar componentes proteicos del hospedero definitivo. En la Unidad de Biotecnología Molecular (UBM) se ha determinado que CatL5Fh puede degradar ST3 (codificado en UBM) por lo cual resulta de interés evaluar esta cisteina proteinasa como un potencial agente de aplicación biomédico. Debido a que la purificación de CatL5Fh nativa a partir de parásitos adultos requiere de inversión de costo y tiempo resultando en bajos rendimientos de la proteinasa pura; el objetivo del presente estudio es expresar rCatL5Fh en el sistema de expresión del vector pET-26b(+) en las cepas BL21 y Rosetta de Escherichia coli, purificar y caracterizar su actividad con el sustrato ST3. rCatL5Fh fue clonada y expresada por fermentación con diferentes concentraciones de IPTG y en distintos tiempos para controlar la formación de cuerpos de inclusión. El más alto rendimiento de producción de rCatL5Fh purificada que se obtuvo con BL21 fue de 4.5 mg por 100 ml de cultivo con 1 mM de IPTG, 37 °C por 16 horas y con Rosetta fue de 6 mg por 100 ml con 0.25 mM de IPTG, 37 °C por 8 horas. Sin embargo, rCatL5Fh purificada por distintos procedimientos no tuvo actividad proteolítica por lo que se sugiere que esta proteinasa requiere transitar por el sistema de secreción para lograr las modificaciones post-traduccionales y el plegamiento adecuado de su forma activa, procesos que no ocurren en los sistemas de expresión procariotas.