Caracterización estructural y funcional de una trombina like con actividad serino proteasa de Bothrops roedingeri jergón de la costa - 2018 - Machaca Yucra, Jhonatan Jose (2018)
La investigación fue realizada en el Laboratorio de Química de Proteinas de la Universidad Católica de Santa María de Arequipa; en colaboración el laboratorio Thomson de Espectrometría de masas del Instituto de Química de la Universidad del Estado de Campinas-Sao Paulo, Brasil, de junio a setiembre del año 2018. El empleo de serinoproteasas de veneno de serpientes, podría tener en el futuro uso como terapia coagulante. El objetivo principal fue Caracterizar estructural y funcionalmente una isoforma de serino proteasa con actividad trombina “like” procedente del veneno de Bothrops roedingeri (Katari). La metodología aplicada fue: la purificación del veneno de serpiente se ha empleado dos pasos cromatográficos de exclusión molecular Superdex G-75 y cromatografía de fase reversa; la caracterización físico-química mediante electroforesis y espectrometría de masas en Tadem Electrospray (ESI); la actividad enzimática mediante el método DL- BapNA, PMSF y test de degradación del fibrinógeno; la caracterización estructural y análisis bioinformatico a través de la plataforma, Swiss-Prot (NCBI-BLAST) y el software DNAstar. Resultados: se obtuvo una serinoproteasa mediante cromatografía de exclusión molecular mostrando 4 picos de actividad serinoproteasa de los cuales el pico II mostro mayor actividad a la cual se denominó TLBroed; con un peso molecular de (27 KDa.), se obtuvo la secuencia N-terminal VIGGDECNINEHR, con acción proteolítica registrando las constantes (Vmax = 4.006 x 10-2 nmoles/min), con acción inhibitoria del (43.34±1,5 %) frente a PMSF y actividad fibrinogenolítica hidrolizando la cadena α y β; y para finalizar TLBroed fue secuenciada mostrando homología con otras serinoproteasas tales como Venombin A 100%, bilineobin 66.7%, Crotalasa 78.5%, Pictobin 73.7%, Gyroxin 71.9%, Collenein-1 71.5%. En conclusión, se purifico una serinoproteasa con actividad trombina-like (TLBroed) del veneno de Bothrops roedingeri mostrando esta actividad proteolítica y fibrinogenolítica y se caracterizó mediante análisis bioinformatico a la TLBroed siendo esta similar en su estructura aminoacidica a otras serinoproteasas.