Desarrollo y pruebas funcionales de un vector binario para la intragénesis de camote (Ipomoea batatas (L.) Lamarck, 1793) - Tovar Rodríguez, José Carlos (2011)
La intragénesis es un método de mejoramiento genético de plantas. Utiliza la tecnología del ADN recombinante para introducir modificaciones genéticas llamadas “ADNs derivados de planta” (P-ADNs). La peculiaridad de la intragénesis radica en que utiliza exclusivamente secuencias del genoma de la planta a mejorar. La intragénesis es una alternativa a la transgénesis, propuestacon el fin de disminuir el costo regulatorio de los cultivos biotecnológicos y mejorar su aceptación. Eldesafío para usarintragénesises que se necesita un vector binario específicamente desarrollado para la especie que se desea mejorar. En este trabajo construí un vector binario para hacer intragénesis en camote. Para conseguir esto, ensamblé secuencias de camote imitando las secuencias borde de Agrobacteriumtumefaciens, que delimitarán el P-ADN. También construí sitios de recombinación (lox) modificados que permitirán usar el sistema Cre-loxpara escindir las secuencias que no sean de camote, que incluyen al marcador de selección; y un sitio de clonamiento múltiple, que permitirá insertar genes de interés. Encontré que los sitios loxmodificados fueron funcionales, pero los bordes del P-ADN no. La falta de funcionalidad de los bordes diseñados puede deberse a secuencias aledañas faltantes, las cuales aún no han sido caracterizadas. Sugiero obtener una mayor diversidad de secuencias genómicas de camote para ensamblar bordes más similares a los de A. tumefaciens. En este trabajo reporto la primera demostración del uso del sistema de escisión Cre-loxen intragénesis.